Inhibition of invasive and chemotactic abilities of SKOV3 cells by human epithelial growth receptor-2 small interfering RNA

目的 探讨HER-2小分子干扰RNA(siRNA)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭和趋化能力的影响.方法 选用已知的干扰磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的特异性位点作为阳性对照,采用蛋白印迹法检测卵巢癌细胞株SKOV3细胞GAPDH蛋白和HER-2蛋白的表达水平,以吸光度(A)值表示.然后在HER-2基因的编码区内根据干涉位点的筛选原则,选择HER-2 siRNAⅠ、HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ 3段靶序列,体外转录合成HER-2 siRNA.实验分为4组:空白对照组、脂质体组、非特异性转染组(非特异性siRNAⅢ)、特异性转染组(HER-2 siRNAⅢ),以β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,用荧光实时定量PCR和蛋白印迹法检测转染前后SKOV3细胞HER-2 mRNA和蛋白表达的变化;细胞侵袭实验和细胞趋化实验检测转染前后SKOV3细胞体外侵袭和趋化能力的变化.结果 GAPDH siRNA 能明显抑制SKOV3细胞内源性GAPDH蛋白的表达,空白对照及加入不同剂量(0.5、1.0、1.5、2.0 μg)的GAPDH siRNA转染SKOV3细胞后,其GAPDH蛋白的表达水平分别为0.6855±0.0259、0.5698±0.0275、0.4542±0.0296、0.3341±0.0178及0.1816±0.0180,各剂量间比较,差异有统计学意义(F=198.126,P＜0.01).HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ均有抑制HER-2蛋白表达的作用,HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ转染后SKOV3细胞中HER-2蛋白的相对表达水平(分别为0.2162±0.1589、0.1562±0.0067), 分别与空白对照组、非特异性转染组及转染HER-2 siRNAⅠ的SKOV3细胞(分别为0.3674±0.0350、0.3839±0.0188、0.3532±0.0197)比较,差异均有统计学意义(F=69.461,P＜0.01).不同剂量(0.5、1.0、1.5、2.0 μg)的HER-2 siRNAⅢ转染后,SKOV3细胞中HER-2 mRNA的相对表达水平比较,差异有统计学意义(F=174.53,P＜0.01);HER-2 siRNAⅢ转染后第1、3、6天,SKOV3细胞中HER-2 mRNA的相对表达水平分别为0.0506±0.0017、0.0266±0.0011及0.0154±0.0020,不同时间点比较,HER-2 mRNA的相对表达水平呈明显下降趋势(P＜0.01);特异性转染组SKOV3细胞的侵袭和趋化能力均明显低于非特异性转染组及空白对照组,差异均有统计学意义(F=53.707,P＜0.01;F=11.361,P＜0.01).结论 HER-2 siRNA对卵巢癌细胞HER-2基因的抑制作用呈时间及剂量依赖性,HER-2 siRNA能显著抑制细胞侵袭和趋化能力,这为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。