2005•Zhonghua jianyan yixue zazhiRequires access
The measurement oftransforming growth factor β 1 mRNA in peripheral bloodmononuclear cell of patients with chronic hepatic disease by fluorescence quantitativereverse transcription polymerase chain reaction
丁荣梅, 吕建新
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Abstract
目的 建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,检测慢性肝病患者外周血单个核细胞(PBMC)中TGF-β1表达水平.方法构建TGF-β1质粒克隆,以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片断的cRNA作为标准品,在PCR反应体系中加入与模板互补的TaqMan-MGB探针建立荧光定量RT-PCR,检测PBMC中TGF-β1mRNA含量,并对本方法进行方法学评价;同时检测血浆TGF-β1水平.结果重组质粒测序证明插入的片断为TGF-β1特异性片断,荧光定量RT-PCR检测TGF-β1mRNA的灵敏度达6.81拷贝,线性范围为6.81～6.81×108拷贝,批内、批间变异系数分别为1.28%～2.27%和2.56%～2.61%,临床应用显示,慢性乙型肝炎中、重度患者及肝炎后肝硬化患者PBMC中TGF-β1mRNA含量及血浆TGF-β1水平均显著高于正常(P＜0.05).结论荧光定量RT-PCR检测TGF-β1mRNA具有敏感、特异、快速等特点,为TGF-β1 mRNA作为肝纤维化的诊断指标提供方法学依据。