2007•Chinese Journal of NeuromedicineRequires access
Construction of siRNA expression vector targeting hTERT and its expression in 293T cell
赵鹏, 郭永智, 傅震, 尤永平, 陈云祥, 陆小明, 鲁艾林, Ning Liu, 孙天胜, 朱兵
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Abstract
目的 构建靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小片段RNA(siRNA)表达载体,为研究RNA干涉(RNAi)在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础.方法 根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接人质粒载体pRNAT-H1.1/Neo,转染293T细胞,荧光定量RT-PCR和Westemblot法检测转染后293T细胞中hTERT表达.结果 重组质粒经测序鉴定证明hTERT siRNA转录模板完整、正确插入到pRNAT-H1.1/Neo质粒中,并筛选出一个抑制hTERT表达效率最高的序列,其hTERT表达仅达22.90%.结论 利用基因重组和荧光定量PCR等技术能成功构建并筛选出一个抑制效率最好的靶向hTERT的siRNA表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤基因治疗的后续研究奠定基础。