2011•Unpublished venueRequires access
Clone,Expression and Detection of CDV VP2 Gene in E.coli
Cong-Ming Bi, Dongliang Fei, Qiang Chen, Zhao Gang
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Abstract
为表达犬细小病毒VP2蛋白(CPVVP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究,根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体PGEX-6P-1,再将构建成功的原核表达质粒载体PGEX-6P-VP2转化至大肠杆菌BL21中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1755bp,与6个VP2基因序列的同源性为98.7%～99.7%。Western-blotting分析显示,表达产物约为90kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。