In vivo CD40 Silencing by siRNA Infusion in Rodents and Evaluation by Kidney Immunostaining

The co-stimulatory molecule CD40 and its ligand CD40L play a key role in the regulation of immunological processes and are involved in the pathophysiology of autoimmune and inflammatory diseases. Inhibition of the CD40-CD40L axis is a promising therapy, and a number of strategies and techniques have been designed to hinder its functionality. Our group has broad experience in silencing CD40 using RNAi technology, and here we summarize protocols for the systemic administration of a specific anti-CD40 siRNA in different rodents models, in addition to the subsequent quantification of CD40 expression in murine kidneys by immunostaining. The use of RNAi technology with specific siRNAs to silence genes is becoming an essential method to investigate gene functions and is rapidly emerging as a therapeutic tool.Graphic abstract:CD40 siRNA mechanism, [摘要]所述的共刺激分子CD40和其配体CD40L发挥在免疫过程的调控中起关键作用，并参与自身免疫和炎性疾病的病理生理学。抑制CD40 - CD40L轴是一种有前途的疗法，并且已经设计了许多策略和技术来阻碍其功能。我们集团有使用沉默CD40的广泛经验RNAi技术，在这里，我们总结一下协议的具体抗CD40 siRNA在不同的全身用药啮齿动物模型，除了后续孔定量FIC通过免疫染色CD40表达的小鼠肾脏通货膨胀。使用RNAi技术具有特定的siRNA沉默基因的正成为一个重要的方法来investigat È基因功能和正在迅速成为治疗工具。图形摘要：CD40 siRNA机制[背景]共刺激分子CD40及其配体CD40L是涉及自身免疫性和炎症性疾病（包括癌症，移植物抗宿主病，炎症性肠病，系统性红斑狼疮）的病理生理学的最著名的免疫检查点之一。红斑狼疮（SLE） ，类风湿性关节炎，类1型糖尿病，移植排斥反应，和动脉粥样硬化（Lutgens等人; 2010; Ripoll会面。等人，2013 ; deRamón等人。，2015; Hueso等人。，2016; Hueso等。 ，2019; Karnell等，2019）。CD40是43 - 50 kDa的跨膜蛋白属于肿瘤坏死因子（TNF）受体超家族和许多免疫细胞的表面上表达。CD40与其配体CD40L（CD154）相互作用诱导CD40并刺激的下游信号传导的三聚，包括NF- κ即上调乙途径的促炎基因（Elgueta等人，2009）。因此，抑制CD40 - CD40L二联体是一种有前途的疗法，并且已设计出许多策略和技术来阻碍其功能，例如施用CD40与TRAF6相互作用的小分子抑制剂（Bosmans等， 2020 ），脂质体装载抗CD40反义寡核苷酸（ASO）（ARRANZ等人，2013），抗CD40的siRNA（Pluvinet等人，2004; deRamón等人。，2015 ; Hueso等人。，2016） ，或单克隆抗体（Remer et al。，2017）。目前，有3次临床试验测试抗CD40单克隆抗体，CFZ533的安全性和有效性，防止急性排斥反应肾（NCT03663335）或肝（NCT03781414）移植的患者，并评价其效果Ø n个肾脏的患者升upus ñ ephritis（NCT03610516）。其他正在开发的临床试验中使用的抗CD40L抗体（NCT03605927）预防急性移植物抗宿主病（NCT03605927） ，或溶瘤腺病毒载体是表达抗CD40抗体（NCT03852511）治疗晚期或转移性肿瘤。我们小组已经开发化学上稳定，胆固醇-缀合的小抑制RNA抗鼠CD40分子和报道其效力，分布的评价，并影响耐久性以下SYSTE MIC给药（Ripoll会面等人，2013; deRamón等人，2015。 ，Hueso等人，2016，Hueso等人，2019）。她即我们概括描述这一特异性抗CD40 siRNA的全身用药在不同的M协议乌斯车型。