Study of the method of using immunomagnetic bead and fluorescence quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction to detect the cancer cells in peripheral blood of patients with gastric carcinoma

目的 研究免疫磁珠和荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌患者外周血癌细胞的应用价值.方法将不同浓度的人胃腺癌细胞系MGC-803细胞加入到健康人血中,经淋巴细胞分离液收集单核细胞后,等分4份.其中1份直接用于提取RNA(方法Ⅰ)、其他分别用阴性磁珠(方法Ⅱ)、阳性磁珠(方法Ⅲ)及联用阴性和阳性磁珠(方法Ⅳ)富集癌细胞.然后,以癌胚抗原(CEA)mRNA作为分子标志物进行荧光定量RT-PCR检测其相对拷贝数;并检测45例胃癌、30例胃溃疡患者和30名健康人外周血CEA mRNA. 结果方法Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ测得的CEA mRNA相对拷贝数与癌细胞数间有良好的相关性(方法Ⅱ和ⅢP<0.05;方法ⅣP<0.01),尤以Ⅳ方法为佳,可检测出每毫升血中含有的1个胃癌细胞.Ⅰ～Ⅳ方法检测胃癌患者阳性率分别为42.22%、53.33%、51.11%和64.44%;方法Ⅳ与方法Ⅰ比较,差异有显著意义(P<0.05).用方法Ⅳ检测30例胃溃疡患者均为阴性,而其他3种方法检出2例阳性;30名健康人中4种方法均未检出扩增产物. 结论免疫磁珠与荧光定量RT-PCR法可提高胃癌患者外周血CEA mRNA的检出率。