Construction and Characterization o fa cDNA Express ion Library from Human Osteporosis Tissue

目的 构建人骨质疏松骨组织cDNA文库,为筛选与骨质疏松的发生特异相关的基因及探讨骨质疏松发病机制奠定基础.方法以Trizol一步法从骨质疏松小鼠长骨中提取总RNA,分离纯化mRNA,LD-PCR法反转录合成双链cDNA,以λTripEX2为载体,构建骨质疏松小鼠cDNA文库,对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定.结果原始文库的滴度为4.8×105pfu/ml,总克隆数为4.6×105,重组率为96.2%,扩增后文库总滴度为6.1×109pfu/ml,插入片段多分布在0.5～2.6kb之间,绝大部分在1.4～1.9kb左右,文库质量鉴定结果表明,构建的骨质疏松小鼠cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段.结论构建cDNA文库为克隆骨质疏松相关功能基因的研究奠定了基础。