Construction of a recombinant adenovirus vector containing Apoptin gene

目的 构建携凋亡素基因的腺病毒载体,为进一步研究凋亡素基因功能及其作用机制建立基础.方法 Pmel酶切线性化已经构建好的含凋亡素基因的穿梭质粒pAdTrack-CMV-VP3,然后电转化到BJ5183-AD-1细胞中进行同源重组.PacⅠ酶切出含凋亡素基因的腺病毒DNA,然后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒,运用RT-PCR鉴定重组腺病毒.用氯化铯梯度离心纯化病毒.用物理和生物方法确定病毒的滴度.结果 PacⅠ酶切证实同源重组成功.绿色荧光观察证实病毒包装成功并且具有感染力,RT-PCR证实了重组腺病毒具有凋亡素蛋白的编码.重组腺病毒的浓度为84.52×109 VP/ml,滴度为6.561×109 PFU/ml.结论成功构建含凋亡素基因的重组腺病毒,它的滴度足以满足体内外实验。