The effect of all-trans retinoic acid on human RPE cells in cell culture

目的 观察全反视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对培养的视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)的形态、增殖以及对RPE细胞中转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)表达的影响,并探讨ATRA与近视的关系.方法 RPE传代至第3代后以1×105/孔的密度接种于96孔板或以1×106的浓度接种于250ml培养瓶,以10%FBS的F12培养液培养48 h后转为0.5%FBS的F12培养液,12 h后培养液转换为F12和1 nM/ml、5 nM/ml、10 nM/ml、20 nM/ml、30 nM/ml的ATRA.以未加ATRA组作对照.48 h后观察RPE细胞形态,并以MTT法测定其增殖情况,以流式细胞技术检测其细胞凋亡情况,以免疫组化方法检测RPE细胞TGF-β2表达,并以酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)方法测定其上清液的TGF-β2浓度.结果 不同浓度的ATRA对RPE细胞的形态、增殖有不同的影响.＜10 nM/ml的ATRA对RPE细胞的增殖无影响,细胞形态正常,MTT法显示在这些浓度下ATRA对RPE的增殖影响差异无显著性(P＞0.05);10 nM/ml、20 nM/ml、30 nM/ml的ATRA抑制RPE的增殖,MTT法显示ATRA对RPE有明显的抑制作用(P值分别为P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),该效应呈剂量依赖性反应.RPE细胞增大变平,突起减少,部分裂解,活力减弱.流式细胞技术检测提示,10 nM/ml、20 nM/ml、30 nM/ml浓度下细胞凋亡率分别为14.58%、19.95%和21.69%.免疫组化方法检测提示,当RPE的ATRA浓度大于10 nM/ml时,TGF-β2的表达随浓度增高而增加.ELISA结果显示,ATRA浓度＞10nM/ml时,RPE分泌TGF-β2的浓度增加.结论 1 nM/ml、5 nM/ml的ATRA可维持培养的人RPE的生长,≥10 nM/ml引起RPE的增殖抑制,并可诱导RPE的凋亡.10 nM/ml及以上的ATRA引起的RPE病理性改变为理解近视眼的RPE改变提供了一条思路,≥10 nM/ml的ATRA诱导RPE的TGF-β2表达增加可能导致TGF-β2拮抗碱性成纤维细胞生长因子的作用增强,使后者抑制近视发生的作用减弱而促进近视的发展。