Expression of transforming growth factor β2 in human retinal pigment epithelium cells regulated by carbacholby

目的 研究卡巴胆碱对人视网膜色素上皮(RPE)细胞株D407表达转化生长因子β2(TGF-β2)的调控,进而阐明胆碱能药物在近视眼巩膜重塑中的作用.方法 常规培养D407细胞,药物干预前换用无血清培养基培养24h.将传代细胞分为实验组和空白组,实验组分别加入1×10-8、1×10-7、1×10-61×10-5、1×10-4mol/L卡巴胆碱,空白组不加药物.于处理后2、4、8、16、24、48h分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)Western blot法检测细胞中TGF-β2mRNA及TGF-β2蛋白的表达,分析时效与量效关系.结果 空白组细胞TGF-β2mRNA、蛋白质表达水平恒定.实验组D407细胞中TGF-β2mRNA的表达随卡巴胆碱作用时间的延长而逐渐升高,差异有统计学意义(F=4 455.148,P＜0.01)；且随卡巴胆碱浓度的升高逐渐增加,各组的总体比较差异有统计学意义(F=1102.240,P＜0.01).卡巴胆碱浓度与干预时间对TGF-β2mRNA表达的影响存在交互作用(F=2 49.609,P＜0.01).实验组D407细胞中TGF-β2蛋白的表达随时间延长而逐渐升高,各时间点的总体比较差异有统计学意义(F=2 619.21,P＜0.01),不同浓度卡巴胆碱组TGF-β2蛋白的表达总体比较差异有统计学意义(F=2 918.62,P＜0.01),卡巴胆碱浓度与干预时相TGF-β2 蛋白表达的影响存在交互作用(F=186.02,P＜0.01).结论 RPE细胞可表达TGF-β2,卡巴胆碱可以浓度和时间依赖的方式调控RPE细胞中TGF-β2的表达。