Expression and mechanism of cDNA of human bone morphogenetic protein 2 via eukaryotic expression vector in rabbit mesenchymal stem cells

目的 探讨含有人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)cDNA的真核表达载体在兔骨髓基质干细胞(MSCs)中的转录及表达情况,为进一步进行多基因转染MSCs复合纳米仿生骨治疗骨缺损实验提供材料.方法用电穿孔方法将真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2转染至兔MSCs中,荧光显微镜及流式细胞学检查观察转染效果、检测转染效率,定量RT-PCR方法观察hBMP-2 cDNA在兔MSCs中的转录情况,免疫组织化学及western blot方法检测hBMP-2蛋白表达情况,ALP活性定量测定检测hBMP-2蛋白功能.结果电穿孔方法将重组质粒转染至兔MSCs中,荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测转染效率为(42.7±2.1)%,转染24 h后定量RT-PCR方法检测到hBMP-2 cDNA在兔MSCs中的转录片断,免疫组织化学观察到hBMP-2蛋白呈强阳性表达,western blot方法可见18 KD hBMP-2蛋白条带,转染组细胞ALP活性明显提高(P＞0.05).结论pIRES2-EGFP-hBMP2通过电穿孔方法导入兔MSCs,并在其中有效表达,发挥生物学作用。