2006•Zhonghua jianyan yixue zazhiRequires access
Quantitative analysis ofinterleukine-2 receptor α mRNA expression in ankylosingsondylitis by fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reactionand clinical significance
骆方军, 吕建新
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Abstract
目的 利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞白细胞介素2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平,并进行疾病的活动性相关分析.方法根据GenBank提供的序列设计一对引物和一条TaqMan探针.提取外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,加入FQ-RT-PCR反应体系,产物切胶回收与pUCm-T载体连接,用T7RNA聚合酶转成cRNA,制备系列浓度参照物.对其特异性、线性、精密度和探针稳定性进行评价.定量HLA-B27阳性组与阴性组AS患者PBMC的IL-2RαmRNA基因表达并探讨与血浆可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)的相互关系.结果成功构建了IL-2RαmRNA的cRNA参照物.线性范围7～107 cells/ml,批内CV 8.4%,批间CV 9.6%.对各30例HLA-B27阳性与阴性AS的IL-2RαmRNA检测表明,与正常对照组结果比较,阳性组与阴性组IL-2Rα mRNA和sIL-2R有明显差异(P<0.01).IL-2RαmRNA对炎症活动评价的灵敏度为96.7%.结论 FQ-RT-PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点;IL-2RαmRNA比sIL-2R更能反映强直性脊柱炎患者的炎症活动程度。