RP-HPLC determination of methotrexate in human plasma

目的:建立一种快速、灵敏和准确测定病人血浆中甲氨蝶呤浓度的方法。方法:取病人血浆样品0.5mL 加内标(替加氟400.0μg·mL~(-1))50μL,混匀,加7%高氯酸溶液0.5mL,涡旋1min,离心(15000r·min~(-1))10min,取上清液50μL进样。以 Agilent ZORBAX Eclipe-XDB C_(18)(4.6mm×150mm,5μm)为分析柱;流动相为40mmol·L~(-1)磷酸二氢钾缓冲液(pH=4.5)-乙腈(91:9);流速为1.0mL·min~(-1);检测波长为304nm;柱温为25℃。结果:色谱峰分离良好,无干扰。测定数据根据浓度分高低两段进行线性回归,线性方程分别为:Y=0.2914X-0.1593,r=0.9999(5.0～100.0μg·mL~(-1));Y=0.2581X-0.0005,r=0.9999(0.05～5.0μg·mL~(-1)),定量限为(0.045±0.0025)μg·mL~(-1),最低检测浓度为0.020μg·mL~(-1)。方法回收率为94.8%～106.6%(n=7),提取回收率为83.3%～89.6%(n=7),日内 RSD 为1.6%～5.7%(n=7),日间 RSD 为1.7%～5.5%(n=7)。结论:本方法准确灵敏,操作简便、快速,适用于甲氨蝶呤大剂量化疗时病人血药浓度的监测。