In vitro expression and activity analysis of acetylcholinesterase (AChE) of Tetranychus cinnabarinus

乙酰胆碱酯酶（AChE）在神经信号传导过程中起重要作用，是氨基甲酸酯类和有机磷类农药的主要作用靶标. 对朱砂叶螨AChE进行体外表达和纯化，并分析其活性. 将朱砂叶螨ace基因序列插入到原核高效表达载体pET-30a中，构建表达载体pET-30a/ace，转入表达菌株Escherichia coli BL21（DE3）中，IPTG诱导高效表达；镍柱纯化目的蛋白，经SDS-PAGE和Western Blot鉴定目的蛋白；以纯化的螨AChE为抗原制备抗螨AChE特异性抗体；改良的Ellman法测定螨AChE活性. 结果获得了相对分子质量（Mr）约为68 × 103的较高纯度的螨AChE蛋白，检测大部分为可溶性表达，酶活检测具有乙酰胆碱酯酶活性,并制备了107效价的抗螨AChE特异性抗体. 采用重组AChE（IC50 = 5.4 mmol/L）检测毒扁豆碱抑制活性比螨粗酶液（IC50 = 58.7 mmol/L）灵敏度提高11倍. 本研究构建了螨AChE体外高效表达载体并获得了具有较好活性的重组螨AChE，可为抗AChE杀螨剂的体外高通量筛选和以AChE为靶标的农药残留检测奠定基础.