Midkine-a 通过限制心肌细胞总数的方式阻碍斑马鱼胚胎心脏生长

目的 探讨一种可溶性的外分泌因子midkine-a在斑马鱼胚胎心脏发育过程中的功能. 方法 在整体胚胎上做midkine-a RNA的原位杂交实验;利用原有的转基因斑马鱼系Tg （ pmidkine-a：EGFP） ,动态观察胚胎从出生到心脏发育成形这一段时间心脏荧光表达情况;将原有的转基因斑马鱼体系Tg （ phsp：midkine-a：EGFP） 胚胎进行热休克而过表达midkine-a,观察胚胎心脏表型;利用Tg （ pcmlc2：dsRed）鱼系胚胎的心肌细胞核带有红色荧光,能进行单个心脏心肌细胞计数这一特点,将杂合的Tg （ phsp：midkine-a：EGFP ）鱼系与纯合的Tg （ pcmlc2：dsRed）鱼系交配,以得到Tg （ phsp：midkine-a：EGFP/pcmlc2：dsRed）的杂合胚胎,对其进行热休克而过表达midkine-a,计算每个胚胎心脏内心肌细胞的总数;用吗啉寡聚核苷酸（ morphonino ,MO）阻碍新生胚胎内的midkine-a mRNA表达,观察胚胎心脏表型. 结果 原位杂交试验证实midkine-a在胚胎48 hpf （ hour post fertilization , 受精后, 用来标记斑马鱼胚胎年龄）大时表达于心脏;转基因Tg （ pmidkine-a：EGFP）胚胎在72 hpf时其EGFP表达于心脏;Tg （ phsp：midkine-a：EGFP） 胚胎在过表达midkine-a后心脏变小;吗啉寡聚核苷酸敲除midkine-a对胚胎心脏发育无影响;最后在Tg （ phsp：midkine-a：EGFP/pcmlc2：dsRed ）鱼系胚胎内过表达midkine-a导致其单个心脏内心肌细胞数目变少,与其小心脏外形吻合. 结论 midkine-a在斑马鱼胚胎发育过程中表达于胚胎心脏;过表达midkine-a导致胚胎心脏内心肌细胞总数减少及心脏变小;敲除midkine-a则对胚胎心脏发育无影响.