Relationship between Marek's disease virus load in peripheral blood lymphocytes at various stages of infection and clinical Marek's disease in broiler chickens

Vaccination with herpesvirus of turkey (HVT) vaccine provides protection against clinical Marek's disease (MD) but does not preclude infection with wild-type MD virus (MDV). The quantity of MDV detected in circulating lymphocytes during the early period after infection may be a useful predictor of subsequent clinical MD later in the life. A study was designed to quantify MDV and HVT copy number in peripheral blood lymphocytes (PBL) using real-time polymerase chain reaction between days 5 and 35 post-challenge and to relate this to subsequent development of gross MD lesions. Female commercial broiler chickens were vaccinated with HVT or were sham-vaccinated at hatch, then challenged with MDV strain MPF-57 at day 2 post-vaccination and reared in positive-pressure isolators up to 56 days post-challenge, when all survivors were euthanized. All dead and euthanized chickens were examined post mortem for gross MD lesions. Birds were scored for MD lesions and mortality. MDV and HVT genome copy numbers were determined for each PBL sample. There was an increase in HVT load in PBL between days 7 and 37 post-vaccination, with marked increases between days 7 and 16 and again between days 30 and 37. There was a steady increase in MDV load to 35 days post-challenge. The mean MDV copy number (log10) was greater in chickens subsequently exhibiting gross MD lesions (5.05±0.21) than in those that did not (2.88±0.223), with the largest difference at 14 and 21 days post-challenge (P<0.001). Quantification of MDV during early infection is therefore a potential tool for monitoring MD in broiler flocks. Relation entre la charge en virus de la maladie de Marek dans les lymphocytes du sang périphérique à différents stades de l'infection et les symptômes de maladie de Marek chez le poulet de chair La vaccination avec un vaccin herpès de la dinde (HVT) confère une protection contre les symptômes de la maladie de Marek (MD) mais n'empêche pas l'infection par le virus sauvage de la MD (MDV). La quantité de MDV détectée dans les lymphocytes circulants au tout début de l'infection peut être un indicateur utile de la MD clinique qui apparaît plus tard dans la vie. Une étude a été planifiée pour quantifier le nombre de copies de MDV et HVT dans les lymphocytes du sang périphérique (PBL) en utilisant la PCR en temps réel entre le 5ième et le 35ième jour après l'épreuve et en rapportant cela au développement ultérieur des lésions macroscopiques de MD. Des poulets de chair, femelles, ont été vaccinés ou non avec un vaccin HVT à l'éclosion, puis éprouvés avec la souche MPF-57 du MDV deux jours après la vaccination. Ils ont été placés en isolateurs, en surpression, durant 56 jours après l'épreuve (dpc); à la fin de cette période tous les survivants ont été euthanasiés. Tous les sujets morts et euthanasiés ont fait l'objet d'un examen post-mortem. La mortalité et les lésions macroscopiques dues à la MD ont été enregistrées. Les nombres de copie des génomes du MDV et du HVT ont été déterminés pour chaque échantillon de PBL. Il y a eu une augmentation de la charge en HVT dans les PBL entre le 7ième et le 37ième jour après la vaccination avec des augmentations importantes entre le 7ième et le 16ième jour, puis entre 30ième et le 37ième jour. Il y a eu une augmentation constante de la charge en MDV jusqu'au 35ième jour dpc. Le nombre moyen (log10) de copies de MDV a été supérieur chez les poulets qui ont présentés ultérieurement des lésions macroscopiques de MD (5,05±0,21) comparés à ceux qui n'en avaient pas (2,88±0,223), avec une plus grande différence les 14ième et 21ième jours dpc (P < 0.001). La quantification du MDV au tout début de l'infection est donc un outil potentiel de contrôle de la MD dans les troupeaux de poulets de chair. Beziehung zwischen dem Gehalt des Virus der Marekschen Krankheit in peripheren Blutzellen in verschiedenen Infektionsstadien und dem klinischen Bild der Marekschen Krankheit bei Broilern Die Vakzination mit einer Putenherpesvirus (PHV)-Vakzine führt zum Schutz gegen den Ausbruch der Marekschen Krankheit (MK), schließt aber nicht die Infektion mit einem Feldvirus der Marekschen Krankheit (MKV) aus. Die MKV-Gehalt, der im Frühstadium der Infektion in zirkulierenden Lymphozyten nachgewiesen wird, kann ein guter Indikator für eine später folgende klinische MK sein. Es wurde eine Versuch durchgeführt, um mittels Real Time-PCR die Anzahl von MKV- und PHV-Genomkopien in peripheren Blutlymphozyten (PBL) zwischen dem 5. und 35. Tag nach der Infektion zu quantifizieren und diese zur nachfolgenden Entwicklung von MK-spezifischen pathologisch-anatomischen Veränderungen in Relation zu setzen. Kommerzielle weibliche Broilerküken wurden zum Zeitpunkt des Schlupfs mit PHV geimpft oder scheinvakziniert und am 2. Tag post vaccinationem mit MKV-Stamm MPF-57 belastungsinfiziert. Bis zum 56. Tag nach dem Challenge (dpc), an dem alle überlebenden Tiere euthanasiert wurden, wurden sie in Isolatoren mit positivem Druck gehalten. Alle toten und euthanasierten Broiler wurden post mortem hinsichtlich des Auftretens von MK-spezifischen Veränderungen untersucht. In jeder PBL-Probe wurde die Anzahl der MKV- und PHV-Genomkopien bestimmt. Zwischen dem Tag 7 und 37 nach der Vakzination konnte ein Anstieg des PHV-Gehalts in den PBL mit einem deutlichen Anstieg zwischen Tag 7 und 16 und nochmals zwischen Tag 30 und 37 festgestellt werden. Bis zum 35. Tag nach dem Challenge gab es einen ständigen Anstieg des MKV-Gehalts. Die mittlere Anzahl der MKV-Genomkopien (log10) war in den Broilern mit nachfolgenden MK-spezifischen pathologisch-anatomischen Veränderungen größer (5,05±0,21) als in denen ohne Läsionen (2,88±0,223), wobei die größten Unterschiede zwischen dem 14 und 21 Tag nach der Challengeinfektion auftraten (p < 0,001). Die Quantifizierung von MKV in der Frühphase der Infektion ist deshalb ein geeignetes Mittel zur Untersuchung von Broilerherden auf MK. Relación entre la carga viral de virus de Marek en PBL durante los diferentes estadios de la infección y la enfermedad clínica de Marek en pollos de engorde La vacunación con la vacuna de herpesvirus del pavo (HVT) induce protección frente a los signos clínicos de enfermedad de Marek (MD) pero no evita la infección con virus salvaje de MD (MDV). La cantidad de MDV detectado en linfocitos circulantes durante el periodo inicial tras la infección podría ser un factor de predicción útil del desarrollo posterior de MD clínico en el animal. Se diseñó un estudio para cuantificar el número de copias de MDV y HVT en linfocitos de sangre periférica (PBL) mediante PCR a tiempo real, entre los días 5 y 35 tras el desafío y relacionar este dato con el subsiguiente desarrollo de lesiones de MD macroscópicas. Pollos de engorde comerciales hembra fueron vacunados o no con HVT y posteriormente desafiados con la cepa MPF-57 de MDV a los 2 días postvacunación y alojados en aisladores de presión positiva hasta los 56 días postdesafío (dpc), en el que todos los supervivientes fueron eutanasiados. Todos los pollos muertos o eutanasiados fueron necropsiados para detectar posibles lesiones macroscópicas de MD. Las aves fueron clasificadas según las lesiones de MD y la mortalidad. Se determinaron los números de copias del genoma de MDV y HVT para cada muestra de PBL. Hubo un incremento de carga de HVT en PBL entre los días 7 y 37 post-vacunación, con un marcado incremento entre los días 7 y 16 y otra vez entre los días 30 y 37. Hubo un incremento estable de la carga de MDV hasta el 35 dpc. La media del número de copias de MDV (log10) fue mayor en los pollos que exhibieron subsiguientemente lesiones macroscópicas de MD (5.05±0.21) que en los que no las exhibieron (2.88±0.223), siendo mayor la diferencia a los 14 y 21 dpc (P < 0.001). Así pues, la cuantificación de MDV durante la fase inicial de la infección es un herramienta potencial para monitorear la MD en un lote de pollos de engorde.