Optimization of Resazurin-based Assay for Cytotoxicity Test in Cholangiocarcinoma Cells(การปรบปรงการวเคราะหดวยรซาซรนเพอวเคราะหการตายของเซลลในเซลลมะเรงทอนำด)

The viability of cell cultures is usually assessed from the metabolic capability of cells in converting some chemicals to color dyes which can be conveniently measured by multi-well plate reader. However, the inconsistency between the metabolic assays and direct microscopic examination is usually observed and raised some concerns over the validity of the metabolic assay. Resazurin test, one of the metabolic assays similar to the tetrazolium MTT assay, was evaluated against a fluorescent staining microscopic counting methods. The study was performed in cholangiocarcinoma (CCA) cell line KKU-100 and cells were treated with gemcitabine, a highly potent chemotherapeutic agent. Results were revealed that cell density, types of incubation medium and incubation time of resazurin affect the consistency of the metabolic assay as compared with a microscopic counting. Optimization of resazurin-based assay is necessary to provide resazurin test as a simple, rapid and high sensitive cytotoxicity test for the anticancer drugs for cholangiocarcinoma cells. การอยรอดของเซลลเพาะเลยงมกทำการประเมนดวยการวดความสามารถในการเมแทโบลซมของเซลลโดยการเปลยนสารเคมเปนสทสามารถตรวจวดไดอยางสะดวกโดยเครองอานแพลท อยางไรกตามมกมรายงานกลาวถงความไมเทาเทยมกนของการประเมนผลระหวางวธการวดเมแทโบลซมของเซลลกบการสงเกตโดยตรงจากกลองจลทรรศน ทำใหความเปนหวงถงความถกตองของผลการอานจากการอานสโดยวธตางๆ การวเคราะหดวย resazurin ซงจดเปนการวดสจากเมแทโบลซมของเซลลเชนเดยวกบวธอนเชน tetrazolium MTT ไดนำมาศกษาเปรยบเทยบโดยวดการอยรอดของเซลลมะเรงทอนำด KKU-100ทไดรบยาเคมบำบด gemcitabine โดยการวดยอมเซลลดวยสฟลออเรสเซนทและนบเซลลภายใตกลองจลทรรศน กบวธ resazurin การศกษาพบวาจำนวนเซลล ชนดของนำยาทำปฏกรยา และเวลาของปฏกรยาของresazurinมผลตอความแมนยำของการวเคราะห เมอไดปรบปรงวธการวเคราะห ทงสองวธมประสทธภาพใกลเคยงกน ดงนน วธรซาซรนจงเปนวธทงาย รวดเรว และมความไวสง และสามารถใชเพอทดสอบความไวหรอการตอบสนองตอยาตานมะเรงของเซลลมะเรงทอนำด